Platform TR-FRET untuk kuantifikasi obat molekul kecil yang mudah dalam lisat sel

Abstrak
Banyak target obat yang relevan secara farmakologis terletak di dalam sel, yang membutuhkan terapi molekul kecil untuk menembus membran plasma lebih cepat daripada yang dinonaktifkan secara metabolik atau dikeluarkan oleh pompa efluks. Pengukuran konsentrasi intraseluler yang akurat sangat penting untuk mengkorelasikan potensi biokimia dengan kemanjuran seluler dan mengoptimalkan ligan. Meskipun metrik ini sangat penting, metode saat ini untuk mengukur kadar intraseluler molekul kecil non-fluoresensi secara teknis menuntut dan terbatas dalam throughput, secara signifikan membatasi kemampuan ahli kimia medis untuk mengukur konsentrasi obat seluler dengan mudah dan rutin. Di sini, kami memperkenalkan platform uji TR-FRET throughput tinggi yang mudah berdasarkan teknologi CoraFluor, kelas kompleks terbium yang sangat luminescent, untuk mengukur kelimpahan molekul kecil yang aktif secara biologis dalam lisat sel utuh. Pendekatan kami secara konseptual memperluas uji perpindahan ligan homogen yang ada dan tidak memerlukan reagen atau peralatan tambahan, yang memungkinkan karakterisasi biokimia dan seluler ligan molekul kecil yang komprehensif.